Microbioma intestinal e a doença de Parkinson
Estudo com LcS desenvolvido na China mostrou efeitos favoráveis
nos sintomas não motores e gastrointestinais específicos da enfermidade
Xiaodong Yanga, Xiaoqin Hea, Shaoqing Xua, Yi Zhanga, Chengjun Moa, Yiqiu Laia, Yanyan Songb, Zheng Yanc, Penghui Aia, Yiwei Qiana e Qin Xiaoa
aDepartment of Neurology and Institute of Neurology, Ruijin Hospital, Shanghai Jiao Tong University School of Medicine, Shanghai, P.R. China
bDepartment of Biostatistics, Shanghai Jiao Tong University School of Medicine, Shanghai, PR China
cShanghai Institute of Nutrition and Health, Chinese Academy of Sciences, Shanghai, PR China
A doença de Parkinson (DP) é uma enfermidade neurodegenerativa caracterizada por sintomas motores, incluindo bradicinesia, tremores de repouso e rigidez. No entanto, os sintomas não motores (SNM), como os neuropsiquiátricos, distúrbios do sono-vigília e constipação, ganharam relevância nos últimos anos. Desses sintomas, a constipação está entre os SNM mais comuns da DP, com prevalência de 70%-80%. Muitas características não motoras estão intrinsecamente relacionadas entre si e podem sobrepor-se na sintomatologia e nos tratamentos. Os SNM podem desenvolver-se em qualquer fase da doença e afetar gravemente a qualidade de vida geral dos pacientes com DP, e opções eficazes de gerenciamento foram reconhecidas como uma importante necessidade não atendida no ambiente clínico. No entanto, terapias limitadas estão disponíveis para déficits não motores. As intervenções padrão atuais, como a terapia de reposição de dopamina, são limitadas no tratamento de disfunções não motoras. De fato, alguns aspectos das disfunções não motoras podem até ser agravados pelo tratamento com dopamina.
Houve um aumento na conscientização sobre a associação entre a microbiota intestinal e a DP. À medida que se acumulam evidências sobre os efeitos da microbiota intestinal no desenvolvimento e avanço da doença, outro direcionamento de ação tem sido reconhecido em relação ao uso potencial de estratégias terapêuticas baseadas na microbiota na DP. Consequentemente, as intervenções direcionadas à microbiota, incluindo a administração de probióticos, têm sido cada vez mais avaliadas. Estudos descobriram que a ingestão de leite fermentado, que contém fibras e múltiplas cepas de probióticos ou cápsulas contendo diversas cepas de probióticos (incluindo Bifidobacterium, Lactobacillus e outros) por quatro semanas, pode melhorar os sintomas associados à constipação em pacientes com DP. No entanto, um estudo relatou que o tratamento com probióticos pode aliviar a dor abdominal e o inchaço tanto quanto o tratamento com trimebutina, com menor melhora na constipação. Francamente, ainda existem muitas dúvidas sobre o uso adequado da terapia com probióticos para a DP.
Primeiro, em teoria, os efeitos terapêuticos de um único probiótico e seus efeitos sobre os sintomas gastrointestinais são mais simples de avaliar do que os suplementos com multicepas probióticas. Além disso, uma revisão recente não encontrou evidências convincentes de que os suplementos com multicepas probióticas fossem superiores aos suplementos com um único probiótico. Seria necessário realizar ensaios individuais para confirmar o efeito de um probiótico específico. Em segundo lugar, como a duração da intervenção em ambos os estudos foi de apenas quatro semanas, serão necessários mais estudos sobre a eficácia em longo prazo e o perfil de segurança da administração de probióticos na DP. Na verdade, Bifidobacterium e Lactobacillus estão incluídos na maioria das formulações probióticas, mas são dois dos gêneros que têm aumentado comumente em pacientes com DP. Em terceiro lugar, ainda falta uma análise abrangente do impacto da suplementação de probióticos nos sintomas motores e não motores. E como os probióticos contribuem para a homeostase ou a melhoria dos sintomas, assim como os mecanismos, permanecem sem esclarecimentos.
A cepa Lacticaseibacillus paracasei Shirota (L. paracasei YIT 9029; LcS), anteriormente classificada como Lactobacillus casei Shirota, tem sido utilizada na produção de leite fermentado há mais de 80 anos. Muitos estudos descobriram que o LcS proporciona muitos efeitos benéficos, incluindo proteção contra infecções, melhora na imunorregulação, redução do risco de carcinogênese e aumento da motilidade intestinal. Pela primeira vez, um estudo piloto mostrou melhorias na consistência das fezes e nos hábitos de defecação em pacientes com doença de Parkinson que usaram LcS como suplemento de cepa única.
Neste experimento foi projetado um estudo randomizado, duplo-cego e controlado por placebo para investigar o efeito da suplementação de LcS nas respostas clínicas e na homeostase microbiana intestinal em pacientes com DP. O estudo foi realizado na Clínica de Distúrbios do Movimento do Departamento de Neurologia do Hospital Ruijin da Faculdade de Medicina da Universidade Shanghai Jiao Tong, na China. Os pacientes foram avaliados quanto à elegibilidade quando foram diagnosticados com DP de acordo com os critérios do Queen Square Brain Bank da doença de Parkinson, e foram avaliados quanto ao cumprimento dos critérios de Roma III para constipação funcional. Outros critérios de inclusão e exclusão estão descritos nos Métodos ESI.
Os pacientes elegíveis foram randomizados para receber leite fermentado (100ml, contendo 1×1010 células de LcS vivas) ou um placebo (fabricado pela Yakult Corp., Shanghai, China) uma vez ao dia no café da manhã, por 12 semanas. O placebo foi um leite acidificado sem LcS, com mesmo teor nutricional, cor, sabor e pH, elaborado com os mesmos ingredientes (sem o LcS), com adição de ácido láctico. O ensaio consistiu em um período inicial de duas semanas, uma intervenção de 12 semanas e duas visitas (V1 e V2). As bebidas foram distribuídas a cada participante a cada duas semanas, em pacote refrigerado e armazenadas entre 0°C e 10°C. O engajamento foi monitorado por meio da devolução dos frascos pelos participantes. O estudo seguiu as diretrizes estabelecidas na Declaração de Helsinque e foi aprovado pelo Comitê de Ética do Hospital Ruijin da Faculdade de Medicina da Universidade Shanghai Jiao Tong. Todos os participantes forneceram seu consentimento por escrito. O estudo foi registrado no Chinese Clinical Trial Registry: ChiCTR1800016795, e todos os experimentos foram realizados em conformidade com as leis e diretrizes nacionais da China.
Randomização
Os pacientes elegíveis foram randomizados para o braço probiótico ou placebo usando uma sequência de randomização gerada por computador, por um estatístico independente que não estava envolvido no gerenciamento de dados ou nas análises estatísticas. O tamanho dos blocos não foi divulgado aos investigadores. Os pacientes e investigadores desconheciam a alocação do tratamento. A abertura do cego para análises estatísticas foi realizada após bloqueio do banco de dados.
Avaliação clínica e coleta de amostras
As visitas foram realizadas para cada participante no final do período inicial e no final da intervenção. Foram registrados dados demográficos – idade, sexo e índice de massa corporal (IMC) –, uso de medicamentos antiparkinsonianos, idade de início e duração da doença. A gravidade da doença foi avaliada usando a Escala Unificada de Avaliação da Doença de Parkinson da Movement Disorder Society (MDS-UPDRS) e a escala Hoehn e Yahr (escala H&Y) durante a condição ‘ON’. Sintomas não motores, depressão, ansiedade e qualidade de vida foram avaliados usando a Escala de Sintomas Não Motores (NMSS), Escala de Depressão de Hamilton (HAMD-17), Escala de Ansiedade de Hamilton (HAMA) e Questionário de Doença de Parkinson de 39 itens (PDQ-39), respectivamente. A função cognitiva foi avaliada pelo Mini Exame do Estado Mental (MEEM) e Avaliação Cognitiva de Montreal (MoCA). A dosagem diária equivalente de levodopa (LEDD) foi calculada de acordo com estudo publicado anteriormente. A gravidade da constipação foi avaliada usando o Sistema de Pontuação de Wexner para Constipação. A qualidade de vida relacionada à constipação, incluindo desconforto físico, desconforto psicossocial, preocupações/preocupações e satisfação, foi medida por meio do questionário qualidade de vida relacionada à constipação (PAC-QOL).
Os participantes foram treinados para preencher o diário de fezes duas semanas antes do início do estudo e nas semanas 11 e 12 do período de intervenção – os números médios foram calculados incluindo o número de evacuações (BMs), a consistência das fezes e o uso de laxantes. A consistência das fezes foi avaliada pela Escala de Forma de Fezes de Bristol (BSFS: 1 = caroços duros; 2 = salsicha com grumos; 3 = salsicha quebrada; 4 = salsicha lisa; 5 = caroços moles; 6 = pastosa; 7 = aguada). Amostras de fezes e sangue foram coletadas de cada participante no final do período inicial e no fim da intervenção. As amostras fecais frescas foram coletadas pelos pacientes pela manhã usando recipientes estéreis para coleta de fezes, imediatamente transportadas em gelo para o hospital e, depois, armazenadas a -80°C antes do teste. As amostras de sangue foram coletadas em tubos contendo ácido etilenodiaminotetracético (1mg ml-1) e glutationa (1mg ml-1) e imediatamente centrifugadas (3.000 rpm por 10min a 4°C). O plasma foi extraído das amostras de sangue, transferido para um novo tubo de centrífuga e armazenado a -80°C antes do processamento.
Sequenciamento de 16S rRNA e medição da metabolômica
As regiões V3-V4 do gene 16S rRNA foram amplificadas e sequenciadas em uma plataforma Illumina MiSeq (Illumina Inc., CA, EUA). Uma abordagem metabolômica direcionada baseada em um método validado foi utilizada para analisar as amostras fecais, com um total de 111 metabólitos quantificados. A L-tirosina plasmática foi medida utilizando um cromatógrafo líquido de alta eficiência com detector de fluorescência (HPLC-FLD). Detalhes da extração da amostra e dos métodos de detecção estão descritos nos Métodos ESI.
Análises estatísticas
O tamanho da amostra de 92 pacientes foi calculado para atingir um erro tipo I bilateral de 5% e um poder de 90%, com base em uma diferença média de 1,1 (DP = 1,6) no número de evacuações completas (CBMs) por semana entre o grupo probiótico e o grupo placebo, de acordo com um RCT publicado anteriormente. Assumindo uma taxa de abandono de 20%, planejou-se inscrever um total de 112 pacientes. Todas as análises de dados foram realizadas seguindo os princípios da intenção de tratar. Os dados faltantes foram imputados com o último valor transportado. Os dados quantitativos são apresentados como média ±desvio padrão (DP) e os dados qualitativos são apresentados como frequência (porcentagem). O teste de Wilcoxon pareado foi usado para analisar as diferenças nas características clínicas entre o início do estudo e a semana 12 no grupo probiótico e no grupo placebo. As diferenças nas características clínicas entre os grupos de randomização foram analisadas pelo teste U de Mann-Whitney para dados quantitativos ou pelo teste do qui-quadrado para dados qualitativos. O efeito do tratamento em escala contínua foi analisado utilizando um modelo de regressão linear geral, ajustando-se para potenciais fatores de confusão conforme apropriado. A correlação foi calculada usando a análise de correlação de postos de Spearman. A análise estatística foi realizada utilizando o software SPSS (versão 22.0; SPSS Inc., Chicago, IL) e o software R (versão 3.1.0, R Project for Statistical Computing). Os valores P para testes múltiplos foram corrigidos pelo método Benjamini-Hochberg para a taxa de falsa descoberta (FDR). Os níveis de significância, incluindo o valor P e o valor FDR-P, foram fixados em 0,05 (bicaudal).
Resultado confirma melhoras
Após 12 semanas de intervenção, os sintomas relacionados à constipação melhoraram visivelmente em comparação com os dados iniciais do estudo do grupo do probiótico (pontuação de Wexner: 10,88 ± 4,44 vs. 13,52 ± 4,05, P<0,001; pontuação BSFS: 3,32 ± 1,02 vs. 2,90). ± 1,01, P<0,001; BMs: 3,99 ± 2,20 vs. 2,70 ± 1,87, P< 0,001; PACQoL: 49,65 ± 13,44 vs. 62,65 ± 12,48, P<0,001). Também foi descoberto que as pessoas do grupo probiótico diminuíram o uso de laxantes (2,13 ± 2,44 vs. 2,50 ± 2,52, P=0,045). Além disso, 12 semanas de suplementação de LcS melhoraram os sintomas não motores com base no NMSS (37,60 ± 21,41 vs. 46,22 ± 22,82, P<0,001), HAMD-17 (5,80 ± 4,31 vs. 7,11 ± 4,43, P<0,001) e HAMA (11,65 ± 5,55 vs. 13,66 ± 5,47, P<0,001).
A intervenção com o LcS melhorou as pontuações de qualidade de vida medidos no PDQ-39 (19,45 ± 17,29 vs. 21,03 ± 16,62, P<0,001) em comparação com as pontuações iniciais. Por fim, houve mudança significativa nas pontuações NMSS e HAMA no grupo placebo antes e após a intervenção (NMSS: 52,10 ± 33,48 vs. 54,56 ± 33,75, P=0,007; HAMA: 13,48 ± 7,26 vs. 14,11 ± 7,54, P=0,001). A hipótese é que a disposição dos pacientes foi motivada principalmente pelo desejo de continuar a desfrutar de tais produtos alimentícios ou mesmo pelo efeito placebo.
Em comparação com o grupo placebo, os sintomas relacionados à constipação do grupo de intervenção com LcS foram significativamente aliviados conforme avaliado pela Pontuação de Wexner (diferença média: -2,78, IC 95% (intervalo de confiança): -3,51, -2,05, P<0,001), pontuação BSFS (diferença média: 0,42, IC 95%: 0,18, 0,65, P=0,001), BMs (diferença média: 1,26, IC 95%: 0,72, 1,79, P<0,001) e PACQoL (diferença média: -11,72, 95% IC: -14,92, -8,52, P<0,001).
Além disso, a suplementação com o probiótico resultou em uma redução estatisticamente significativa no NMSS (diferença média: -6,50; IC 95%: -9,28, -3,73, P<0,001), HAMD-17 (diferença média: -1,23, IC 95%: -1,80, -0,65, P<0,001), HAMA (diferença média: -1,44, IC 95%: -2,20, -0,67, P<0,001) e PDQ-39 (diferença média: -1,88, IC 95%: -3,26, -0,50, P=0,008) em comparação com o placebo. Finalmente, não houve alteração nas necessidades de terapia dopaminérgica (LEDD) entre os dois grupos. A intervenção com LcS não teve efeito significativo nas pontuações da MDS-UPDRS, exceto nas pontuações da MDS-UPDRS I – experiências não motoras do cotidiano – (diferença média: -0,99, IC 95%: -1,62, -0,37, P=0,002).
Influência da intervenção na microbiota intestinal
Primeiro, foram comparados os efeitos da intervenção nas mudanças na composição da microbiota fecal após 12 semanas, em comparação com o período inicial nos grupos probiótico e placebo. A riqueza e diversidade da comunidade microbiana indicada pelos estimadores Chao1, Simpson e Shannon não mostraram alterações significativas no período inicial ou na semana 12 nos dois grupos. Para avaliar as alterações da β-diversidade na microbiota intestinal entre os grupos, a análise de coordenadas principais (PCoA) foi aplicada a todo o conjunto de dados de contagens bacterianas com base nas métricas UniFrac não ponderadas. Não encontramos diferença na β-diversidade entre o início e o acompanhamento para os grupos probiótico e placebo.
Houve mudanças na composição da microbiota fecal de diferentes níveis taxonômicos, variando do filo ao gênero, após 12 semanas de intervenção em comparação com o período inicial. Entretanto, após a correção do FDR para múltiplos testes, apenas a abundância relativa do gênero Lacticaseibacillus aumentou significativamente no grupo probiótico (P<0,001). Em seguida, as mudanças na abundância relativa da microbiota fecal entre os grupos probiótico e placebo foram comparadas. Entre eles, a ordem Veillonellales-Selenomonadales, família Veillonellaceae e gênero Lacticaseibacillus mostraram as mesmas tendências no grupo probiótico antes e depois da intervenção. Após a correção do FDR, apenas a mudança na abundância relativa do gênero Lacticaseibacillus foi a mais diferente significativamente (P<0,001).
Influência da intervenção nos perfis metabolômicos fecais
Não houve mudanças significativas na composição dos metabólitos fecais entre os quatro grupos avaliados por PCA. Comparando cada metabólito, não houve diferença entre o grupo probiótico e o grupo placebo no início do estudo. Uma análise estratificada pelas principais categorias de metabólitos mostrou que a abundância relativa de metabólitos de aminoácidos foi significativamente alterada no grupo probiótico após 12 semanas de suplementação com o probiótico, em comparação com o início (40,18% vs. 37,28%, P=0,045). Entretanto, após a correção do FDR nenhuma das diferenças entre os metabólitos foi significativa. Em seguida, foram comparadas as alterações dos metabólitos entre os grupos probiótico e placebo. Em comparação com o grupo placebo, o grupo probiótico alterou significativamente as concentrações fecais de L-tirosina (alteração: -12,50 ± 33,77 vs. -0,29 ± 31,08 ng mg-1, P=0,020), ácido 3,4-dihidroxihidrocinâmico (alteração: -1,84 ± 26,91 vs. -4,52 ± 31,81 ng mg-1, P=0,044) e ácido glicérico (alteração: -0,22 ± 0,98 vs. 0,21 ± 1,46 ng mg-1, P=0,045). Em seguida, medimos a concentração de L-tirosina plasmática em amostras de plasma em jejum. No início do estudo não foram observadas diferenças nos níveis plasmáticos de L-tirosina entre os grupos. Após o tratamento, a concentração plasmática de L-tirosina foi substancialmente alterada apenas no grupo probiótico (11,20 ± 3,08 μg ml-1 vs. 17,02 ± 8,97 μg ml-1, P=0,002). A alteração na concentração plasmática de L-tirosina no grupo probiótico foi maior do que no grupo placebo (alteração: 5,81 ± 8,27 vs. 1,90 ± 7,67, P=0,016). Foi testada especificamente a correlação entre alterações nas concentrações fecais e plasmáticas de L-tirosina. Descobriu-se que as alterações nas concentrações fecais de L-tirosina estavam negativamente associadas às alterações nas concentrações plasmáticas de L-tirosina (r = -0,27, P=0,037) no grupo probiótico, mas isso não ocorreu no grupo placebo (r = -0,19, P=0,169).
Características dos participantes do estudo
Um total de 163 pacientes foi recrutado para triagem entre agosto de 2018 e janeiro de 2019, e 35 foram excluídos por não atenderem aos critérios de inclusão (n = 35). No total, 128 pacientes inclusos foram randomizados e alocados no grupo probiótico (n = 65) ou no grupo placebo (n = 63). Onze pacientes do grupo placebo não conseguiram completar a intervenção devido ao atraso no fornecimento de placebo na semana 10. A intervenção com o placebo para esses pacientes foi encerrada ao final de 10 semanas, amostras de fezes e sangue foram coletadas e a avaliação clínica foi realizada naquele momento. Os dados obtidos destes pacientes foram incluídos na análise de intenção de tratar como dados da semana 12. No geral, não foram relatados eventos prejudiciais relacionados à ingestão da bebida teste. Todas as análises foram realizadas usando um procedimento de intenção de tratar. As características clínicas iniciais foram semelhantes entre os dois grupos de estudo.
Discussão demonstra o efeito da cepa LcS
Este ensaio foi realizado para investigar o efeito da ingestão relativamente prolongada de LcS em medidas combinadas do funcionamento gastrointestinal e na saúde metabólica em pacientes com doença de Parkinson com constipação. O estudo sugere que, embora a suplementação de LcS não tenha induzido grandes mudanças na composição global da microbiota, o probiótico teve efeitos favoráveis nos SNM de pacientes com DP. A constipação é um dos sintomas mais frequentes em pacientes com a doença.
As causas subjacentes da constipação na DP são multifacetadas. Além da fraqueza física, os riscos do estilo de vida – como a redução da ingestão de líquidos – podem promover significativamente o aparecimento de constipação. Além disso, os efeitos colaterais dos medicamentos anti-DP podem piorá-lo. Também foi levantada a hipótese de que a disbiose intestinal contribui para o aparecimento e a manifestação clínica da constipação. A má administração da constipação em pacientes com DP leva à oclusão intestinal, assim como ao comprometimento do efeito terapêutico da levodopa.
Um tratamento oportuno e eficaz é essencial para reduzir a carga de sintomas e melhorar a qualidade de vida dos pacientes. O uso potencial de probióticos como tratamento alternativo para constipação em pacientes com DP foi estabelecido. Sabe-se que o LcS alivia a constipação em diferentes populações. Seu consumo diário também mostrou prevenir eventos gastrointestinais adversos associados a medicamentos. Estas descobertas estão de acordo com estudos anteriores, que indicam que 12 semanas de ingestão do probiótico LcS é um método eficaz e seguro para aliviar os sintomas de constipação em pacientes com DP. Além disso, nosso estudo é o primeiro a demonstrar que a suplementação de LcS também pode melhorar os sintomas relacionados à constipação, reduzir a carga dos sintomas e melhorar a qualidade de vida dos pacientes com DP, conforme avaliado pelos escores PACQoL e PDQ-39.
Ansiedade e depressão são sintomas não motores comuns em pacientes com DP, com potencial impacto negativo na incapacidade motora e na qualidade de vida. O mecanismo de perturbação do humor em pacientes com a doença não é claro, e a hipótese atual inclui alterações nos neurotransmissores (como serotonina (5-HT), dopamina (DA), noradrenalina (NE) e acetilcolina (ACh) e lesões dos circuitos subcorticais frontais. A partir destes resultados, foi descoberto que o tratamento adjuvante com LcS conferiu efeitos clínicos adicionais na melhora da depressão em pacientes com DP.
Houve melhora na ansiedade tanto no grupo probiótico quanto no grupo placebo. No entanto, uma magnitude maior de melhoria foi observada no grupo probiótico em relação ao grupo placebo. Foi demonstrado que o probiótico LcS proporciona efeitos psicológicos positivos, melhorando os distúrbios de humor em idosos e reduzindo os sintomas de ansiedade em pacientes com síndrome de fadiga crônica. Um estudo RCT também descobriu que o consumo diário de LcS durante nove semanas pareceu melhorar os sintomas potencialmente depressivos, diminuiu significativamente os níveis de IL-6 e regulou a microbiota intestinal associada à doença mental. No entanto, estudos limitados exploraram o uso de probióticos para doenças mentais em pacientes com DP.
A partir dos resultados deste estudo foram demonstrados os efeitos benéficos do probiótico LcS no alívio da depressão e da ansiedade nesses pacientes. Um estudo descobriu que 12 semanas de consumo misto de probióticos por indivíduos com DP tiveram impactos úteis nas pontuações do MDS-UPDRS. Porém, este estudo avaliou apenas a pontuação total da UPDRS e não sintomas motores ou não motores. Uma suposição é que a melhora nas pontuações totais da UPDRS pelos probióticos neste estudo possa ser devido, principalmente, à melhora nos sintomas não motores. Outra preocupação é se a eficácia do tratamento com probióticos é influenciada por antibióticos ou tratamentos dopaminérgicos. No entanto, não houve diferença no LEDD entre os dois grupos experimentais, não houve uso de antibióticos durante o experimento e nenhuma mudança consciente nos medicamentos anti-DP antes ou depois do experimento. Também foi descoberto que as pessoas do grupo probiótico diminuíram ligeiramente o uso de laxantes.
COMPARAÇÕES ENTRE ESTUDOS
Este estudo forneceu dados sobre a eficácia da suplementação com LcS, que exerceu efeitos positivos sobre o humor e os sintomas gastrointestinais em pacientes com DP. No entanto, ainda faltam informações sobre como os probióticos contribuem para a homeostase ou melhoram os sintomas. Além disso, os mecanismos pelos quais o tratamento funciona em pacientes com DP permanecem sem esclarecimentos. Evidências crescentes indicam que alterações na microbiota intestinal e nos metabólitos fecais podem contribuir para a constipação e seus sintomas relacionados.
Neste estudo, foi realizada uma análise multiômica integrativa para investigar a microbiota intestinal e seus metabólitos em pacientes com DP após tratamento com LcS. Foi descoberto que a ingestão diária de LcS não resultou em maior diversidade e estabilidade da composição da microbiota. No entanto, o probiótico levou a um aumento significativo na abundância relativa de Lacticaseibacillus entre o início e após a intervenção. Além disso, após a correção do FDR, Lacticaseibacillus foi o único microrganismo responsável pela diferença entre os dois grupos – o que não foi surpreendente, uma vez que o probiótico LcS foi administrado.
Em estudos anteriores, também foi sugerido que a administração de LcS provavelmente afeta indiretamente a composição da microbiota intestinal, uma vez que a ingestão do LcS influenciou a abundância de outras cepas em vez de apenas aumentar as concentrações de LcS. Foi relatado que a ingestão em longo prazo de LcS aumenta os níveis populacionais de bifidobactérias indígenas, bem como os níveis de concentração de ácido orgânico fecal. Além disso, foram descritos vários mecanismos diferentes que explicam os efeitos dos probióticos, como a modulação imunológica, a produção de ácido láctico (consequentemente reduzindo o pH local) e a adesão ou o deslocamento competitivo de bactérias patogênicas. O LcS pode melhorar comportamentos semelhantes aos da depressão em ratos através da regulação positiva dos níveis de expressão das monoaminas 5-HT, DA e NE e da ativação da sinalização BDNF-TrkB.
Neste estudo, foi analisado um total de 111 metabólitos fecais e não foram encontradas mudanças significativas na composição dos metabólitos fecais entre os grupos, especialmente ácidos graxos de cadeia curta (AGCC) ou outros metabólitos envolvidos na DP. No entanto, foi descoberto que o LcS poderia diminuir a concentração fecal de L-tirosina. Foi suposto que a suplementação de LcS pode melhorar a digestão prejudicada e a absorção de L-tirosina no trato digestivo superior de pacientes com DP. De fato, foi descoberto que o LcS aumentou a concentração plasmática de L-tirosina e que a alteração na L-tirosina plasmática estava negativamente associada à sua concentração nas fezes. A L-tirosina é o precursor bioquímico das catecolaminas, como DA e NE.
Foi demonstrado que as bactérias intestinais são capazes de aumentar a biodisponibilidade luminal de DA através de enzimas como β-glucuronidase e tirosina descarboxilase. DA é sintetizado a partir de L-tirosina via L-3,4-dihidroxifenilalanina (L-DOPA) pela tirosina hidroxilase (TH) e L-aminoácido descarboxilase aromática (AADC). A L-tirosina pode ter o potencial de melhorar uma variedade de funções cerebrais relacionadas à DA e NE, melhorando assim a doença mental e a qualidade de vida em pacientes com DP – embora o papel exato da L-tirosina na contribuição do LcS para a melhora dos sintomas da DP ainda precise de mais estudos. Enquanto isso, outro ECR descobriu que o probiótico Probio-M8 poderia aumentar o nível sérico de DA em pacientes com DP, o que é semelhante aos resultados deste estudo. No entanto, sabe-se que apenas a L-DOPA (mas não a DA) poderia atravessar a barreira hematoencefálica e aliviar os sintomas relacionados à DP.
Limitações do experimento e conclusões
Existem algumas limitações neste estudo. Primeiro, o número de pacientes que não conseguiram completar a intervenção foi diferente entre os grupos (2 no grupo probiótico e 15 no grupo placebo). Para 11 pacientes do grupo placebo, a intervenção foi encerrada na semana 10 devido a um atraso no fornecimento do placebo. A análise de intenção de tratar foi realizada incorporando os dados desses 11 pacientes na semana 10 com os da semana 12. Outro aspecto que também poderia ser considerado uma limitação foi o fato de a amostragem fecal ter sido realizada apenas no início e no final do estudo. Um quadro mais completo das alterações na microbiota intestinal teria sido possível com amostragens mais frequentes. A análise metagenômica shotgun, que pode fornecer informações mais detalhadas sobre a microbiota – especialmente na análise mais profunda das espécies – poderia fornecer mais informações sobre as mudanças na composição da microbiota intestinal.
A dieta pode ter uma influência maior na microbiota intestinal. Em consonância, deve-se reconhecer a limitação de não terem sido avaliadas as diferenças nos níveis de estrutura alimentar entre os dois grupos. O ponto forte deste estudo foi a minuciosa caracterização fenotípica dos participantes quanto à avaliação subjetiva e quantitativa dos parâmetros gastrointestinais, bem como o desenho randomizado controlado com período de intervenção relativamente longo. Diferentemente dos estudos anteriores, foi aplicado o perfil do amplicon 16S rRNA e a metabolômica bacteriana quantitativamente direcionada, o que permitiu entender tanto a resposta da microbiota intestinal quanto os metabólitos bacterianos para obter mais informações sobre as interações metabólicas da microbiota intestinal-hospedeiro em resposta ao LcS.
Este estudo demonstrou que, embora a suplementação de LcS não tenha induzido grandes mudanças no microbioma intestinal global, a ingestão diária de LcS teve efeitos favoráveis nos SNM e nos sintomas gastrointestinais específicos em pacientes com DP. O estudo ‘Efeito da suplementação do Lacticaseibacillus paracasei Shirota nas respostas clínicas e no microbioma intestinal na doença de Parkinson’ foi publicado na Food Funct., 14, 6828-6839, 2023 – DOI: 10.1039/D3FO00728F e registrado no Chinese Clinical Trial Registry: ChiCTR1800016795. •